荚膜型和非荚膜型流感嗜血杆菌双重PCR检测方法的建立和临床应用

目的 建立基于流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae,Hi)外膜蛋白P6编码基因omp6和荚膜编码基因bexA的双重PCR检测方法,并确定其检测限、灵敏度和特异度.方法 根据GenBank公布流感嗜血杆菌的omp6和bexA基因核苷酸序列设计引物,用Hi标准菌株确定其检测限,双重PCR检测289例鼻窦炎患者鼻咽部分泌物(NPS)确定方法的灵敏度与特异度.结果 289例NPS培养阳性率为50.5％,14株为荚膜型;双重PCR检测omp6的阳性率为54.7％,bexA阳性16株.双重PCR与细菌培养及血清凝集试验符合率分别为95.8％和99.3％.检测时模板的下限为3.8 pg/μl.双重PCR检测omp6和bexA基因的灵敏度均为100.0％,特异度分别为91.6％和99.3％.结论 建立的双重PCR是一种快速、特异和敏感的Hi感染的检测和分型方法,可代替细菌培养和血清凝集试验用于临床标本诊断.