基于SpeedStar HS DNA聚合酶的高速逆转录PCR方法在流感病毒检测中的应用

目的 使用具有高扩增效率的SpeedStar HS DNA聚合酶建立快速、可靠的RT-PCR反应体系,应用于流感病毒核酸检测工作,以提高工作效率、缩短检测周期.方法 建立优化的基于SpeedStar HS DNA聚合酶的高速RT-PCR体系,并与应用较广的Takara one step PrimeScript RT-PCR试剂盒比较.2种方法通过对A型和B型流感的基因标准品的一系列10倍稀释液分别检测,比较两者的分析灵敏度、反应时间、扩增效率等.通过对150份流感阳性样品进行检测,比较两者的诊断灵敏度.结果 2个PCR反应体系的灵敏度相当,最低检出限均为10 copy/μl阳性标准品,均有较好的扩增效率,达到90％以上.对150份阳性样本检测的结果表明2种方法有较好的一致性.结论 基于SpeedStarHS DNA聚合酶的高速RT-PCR反应体系较之Takara one step PrimeScript RT-PCR试剂盒灵敏度相当,都有很好的扩增效率,且反应抑制性小,整个PCR时间更短,可应用于流感病毒检测工作,且能明显提高实验室检测的工作效率.