实时荧光定量PCR法检测人粪便中艰难梭状芽孢杆菌

目的 摸索并明确实时荧光定量PCR技术检测人体肠道粪便中艰难梭状芽孢杆菌的方法.方法 用16S rRNAreal-time PCR方法检测喘息患儿与正常儿童肠道内梭状芽孢杆菌的数量.结果 常规PCR扩增出艰难梭状芽孢杆菌16S rRNA部分基因片段长度为500 bp ～750 bp,测序结果正确,符合预期,成功构建了艰难梭状芽孢杆菌实时荧光定量PCR中的标准品,生成的标准曲线r2＞0.995;实时荧光定量PCR产物的溶解曲线为单峰,表明实时荧光定量PCR的特异性强.对待测80份样本分批进行荧光定量PCR检测,各组间标准品Ct值的变异系数(CV)为4.96％、3.45％、2.46％、2.43％和2.75％.80份儿童粪便样本中艰难梭状芽孢杆菌含量的对数值为3.70 ±2.71(copy/g湿便).结论 本研究表明,实时荧光定量PCR方法操作简便、灵敏度高、特异性强、自动化程度高,适用于人体粪便中艰难梭状芽孢杆菌含量的检测.