双链RNA饲喂干扰家蝇CYP6D1基因表达方法的建立

目的 利用饲喂双链RNA(dsRNA)对家蝇拟除虫菊酯抗性相关基因CYP6D1的表达进行干扰,并对干扰效果进行评价.方法 化学合成家蝇CYP6D1基因,连接入载体质粒L4440,转化入大肠埃希菌DH5α扩增质粒.抽提质粒,将其转化到大肠埃希菌HT115 (DE3),并在异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下表达CYP6D1基因的dsRNA.将含有CYP6D1基因dsRNA的HT115(DE3)饲喂家蝇,72 h后通过荧光相对定量技术评价家蝇体内CYP6D1基因的表达变化.未进行质粒L4440转化的大肠埃希菌菌株HT115(DE3)饲喂家蝇作为对照.结果 采用2-ΔΔCt法对对照组和处理组的mRNA相对表达量进行定量.目的基因和内参基因标准曲线R2值均＞0.99,扩增效率M值均在0.90～1.10之间.与对照组相比,处理组CYP6D1基因mRNA相对表达量下降了40.1％,两者之间差异有统计学意义(t=-11.377,P=0.008).结论 初步建立了饲喂dsRNA对家蝇拟除虫菊酯抗性基因CYP6D1表达进行干扰的方法,在mRNA水平上实现基因表达干扰效果.