亚砷酸钠对L-02肝细胞微小RNA-191与金属蛋白酶组织抑制因子3表达的影响

目的 了解亚砷酸钠(NaAs02)对人正常肝细胞(L-02)微小RNA-191 (miR-191)与金属蛋白酶组织抑制因子3 (TIMP-3)表达的影响.方法 用不同剂量NaAs02[0(对照组)、5、25、50、75 μmol/L]染毒L-02肝细胞24h;用5和25 μmol/L NaAs02染毒L-02肝细胞0(对照)、12、24、48 h;采用抑制剂(miR-191 inhibitor)对miR-191表达进行干预.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-191和TIMP-3 mRNA表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测TIMP-3蛋白表达.结果 量-效研究:miR-191和TIMP-3 mRNA、蛋白表达组间比较差异有统计学意义(F=85.674、20.952、123.393,P均＜0.05),其中5、25、50、75 μmol/L组miR-191表达(1.702±0.124、2.077±0.234、2.145±0.105、2.003±0.077)高于对照组(0.990±0.035,P均＜0.05);25、50、75 μmol/L组TIMP-3 mRNA表达(0.848±0.067、0.804±0.081、0.813±0.076)低于对照组(0.996±0.007,P均＜0.05),5μmol/L组TIMP-3 mRNA表达与对照组相比差异无统计学意义(0.939±0.133比0.996±0.007,P＞0.05);5、25、50、75 μmol/L组TIMP-3蛋白表达(0.846±0.093、0.611±0.123、0.554±0.098、0.529±0.067)低于对照组(1.006±0.003,P均＜0.05).时-效研究:miR-191和TIMP-3 mRNA、蛋白表达组间比较差异有统计学意义(5 μmol/L剂量下,F=86.355、16.404、22.898,P均＜0.05;25 μmol/L剂量下,F=104.321、20.123、52.321,P均＜0.05),其中5、25 μmol/L处理12、24、48 h组miR-191表达(1.392±0.152、1.691±0.167、2.018±0.130和1A56±0.167、1.946±0.178、2.259±0.256)高于对照组(1.001±0.014、1.008±0.027,P均＜0.05);5μmol/L处理48 h和25 μmol/L处理12、24、48 h组TIMP-3 mRNA表达(0.824±0.093和0.897±0.033、0.815±0.089、0.709±0.103)低于对照组(1.004±0.018、0.997±0.057,P均＜0.05),5 μmol/L处理12、24h组TIMP-3 mRNA表达与对照组相比差异无统计学意义(0.952±0.072、0.929 ±0.121比1.004±0.018,P均＞0.05);5和25 μmol/L处理12、24、48 h组TIMP-3蛋白表达(0.857±0.068、0.832±0.106、0.691±0.112和0.785±0.097、0.620±0.066、0.453±0.075)低于对照组(1.006±0.045、1.004±0.078,P均＜0.05) .miR-191inhibitor处理:各处理组miR-191和TIMP-3蛋白表达组间比较差异有统计学意义(F=104.306、67.015,P均＜0.05),miR-191 inhibitor可以显著抑制砷所引起的miR-191高表达(0.314±0.094比2.051±0.371,P＜ 0.05)并上调TIMP-3蛋白的表达(1.965±0.277比0.541±0.183,P＜ 0.05).结论 L-02肝细胞中miR-191可应答NaAsO2暴露,呈高表达状态,进而在蛋白翻译水平上抑制其下游靶基因TIMP-3的表达.