奥克托今及其主要合成中间体对中国仓鼠肺细胞凋亡和氧化应激的影响

[背景]奥克托今(HMX)是当今综合性能最好的单质炸药.有研究发现HMX可影响职业暴露者神经行为功能和周围神经传导速度.3,7-二硝基-1,3,5,7-四氮杂双环[3,3,1]壬烷(DPT)是合成HMX的主要中间体,但目前国内外关于DPT的毒性研究尚未见报道.[目的]探讨HMX及DPT对中国仓鼠肺细胞(CHL)细胞凋亡及氧化应激水平的影响.[方法]应用含有0、31.25、62.50、125、250、500 mg·L-1质量浓度(后称浓度)的HMX、DPT分别对体外培养的CHL染毒24h,利用CCK-8法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)荧光强度.采用抗氧化剂干预,即2.5mmol·L-1 N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理CHL4h,经120 mg·L-1 DPT染毒24h后检测细胞活力和凋亡情况.[结果]细胞活力检测结果显示DPT对CHL的半数抑制浓度为119.55 mg·L-1.当DPT浓度为250 mg·L-1时,细胞活力下降至(17.95±2.18)％;HMX浓度为500 mg·L-1时,细胞活力为(83.34±3.03)％.细胞凋亡结果显示,与各自对照组相比,各染毒组的凋亡率均随染毒剂量增加而逐渐升高(P＜0.05).62.50～500 mg·L-1范围内,HMX导致的细胞凋亡率由(15.63±0.58)％缓慢升至(37.00±1.25)％,而DPT引起的细胞凋亡率从(33.75±0.57)％迅速升至(96.57±0.53)％.细胞内ROS检测结果显示,HMX和DPT均能引起细胞内ROS水平升高.但HMX引起细胞内ROS变化较小,250、500 mg·L-1HMX组细胞内ROS荧光强度分别为103.96±5.59和119.61±4.42,而相同剂量DPT组的ROS荧光强度分别为238.52±7.15和451.02±13.02 (P＜0.05).另外,NAC干预可有效缓解DPT引起的细胞活力抑制和凋亡,NAC预处理+DPT组的细胞活力、凋亡率为(76.41±4.91)％、(16.85±0.12)％,而DPT组为(48.02±2.63)％、(62.67±8.49)％(P＜0.05).[结论]相同剂量下DPT对CHL的毒性大于HMX,高剂量DPT引起细胞内ROS水平升高,导致细胞凋亡.