肉制品中沙门菌实时荧光定量聚合酶链反应标准质粒的构建

目的 制备用于检测肉制品中沙门菌实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)的标准质粒.方法 设计针对沙门菌invA基因的引物,扩增特异片段,转入质粒载体中构建重组质粒.将构建的重组质粒作为标准品,进行优化后的实时荧光定量PCR,建立标准曲线,并考察该标准品灵敏性及稳定性.结果 成功构建含有沙门菌invA基因的质粒标准品,用其建立的标准曲线循环阈值(Ct值)与模板的拷贝数呈良好线性关系(r2=0.9979),最低可以检出10 拷贝/反应.该标准质粒经验证具有良好的稳定性.用该质粒标准品检测肉制品中的沙门菌,经2 h增菌后,可在7 h内完成对样品的检测.结论 所构建的质粒标准品可用于荧光定量PCR检测肉制品中的沙门菌,为考量实验质量提供参考依据.