脱腐预处理对土壤总DNA提取质量的影响

目的 探索一种提高土壤总DNA提取质量的简易脱腐方法.方法 于2014年3月,采集河南省某市农田4个采样区的混合土样(07、08、1A、2A).分别用脱腐预处理后试剂盒提取(预处理组)和直接试剂盒提取法(未预处理组)提取土样总DNA,对保守序列16S rDNA和非保守序列(抗生素抗性基因sulⅡ、tetM、tetC和1类整合子酶基因intI1)进行PCR扩增.采用Gene Genius凝胶成像系统定量分析软件Gene Tools进行灰度值分析.结果 预处理组和未预处理组提取的各个土壤总DNA均可扩增出16S rDNA,且PCR产物灰度值差异无统计学意义(均P＞0.05);非保守序列sulⅡ、tetC和intI1基因的PCR扩增产物灰度值在两组中差异无统计学意义(均P＞0.05);预处理组tetM基因的表达水平高于未预处理组,差异有统计学意义(P＜0.05).未预处理组的sul Ⅱ、tetM、tetC和intI1基因PCR扩增产物中均检测出了非特异性条带,而预处理组目的条带单一、较少非特异性条带.结论 脱腐预处理方法提取的土壤总DNA更有利于后续分子生物学实验.