HBx-d431突变体多肽抗体的制备及鉴定

目的 利用人工合成多肽制备针对乙肝病毒X基因突变体HBx-d431的特异性多克隆抗体,为进一步研制HBx-d431免疫检测试剂盒打基础. 方法 采用生物信息学和多肽合成法制备HBx-d431特异性多肽(HBx-d431P)、高效液相色谱法(HPLC)和电喷雾离子化质谱(ESI-MS)鉴定合成多肽的纯度和分子量.用化学方法将多肽与匙孔血蓝蛋白(KLH)偶联成多肽抗原HBx-d431P-KLH,并经完全弗氏佐剂(CFA)和不完全弗氏佐剂(IFA)乳化,免疫新西兰雄性大白兔.用ELISA鉴定抗血清效价、亲和层析法纯化抗体、Dot blot评价抗体特异性. 结果 经HPLC和ESI-MS分析,合成的多肽满足HBx-d431特异性抗体制备的要求.ELISA和Dot blot试验结果显示,兔抗血清的效价达6.4×104,纯化后的HBx-d431抗体特异性高. 结论 本研究制备了抗HBx-d431特异性抗体,为进一步研制HBx-d431免疫检测试剂盒奠定了基础.