大鼠抗肠道病毒71型衣壳蛋白VP1特异性中和单克隆抗体的研制与应用

目的 研制大鼠抗肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白VP1特异性中和单克隆抗体(单抗),并用Western印迹、ELISA和免疫荧光检测(IFA)等方法验证其特异性 方法 采用单克隆杂交瘤技术人工合成包含EV71 VP1中和抗原决定簇位点SP70的多肽偶联载体蛋白KLH,腹腔内注射免疫大鼠数次后,取有预期免疫应答的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA法筛选和有限稀释法亚克隆获得稳定的阳性单克隆杂交瘤细胞株并鉴定其IgG亚型.选取其中1株单克隆杂交瘤细胞系BC6,体外培养后注射于SCID裸鼠腹腔制备腹水以产生大量抗体,用Protein A层析柱亲合纯化后获得纯化抗体.细胞培养微量中和试验测定该单抗中和EV71的滴度,并将其用于多种方法检测EV71特异性抗原.结果 共获得8株稳定的单克隆杂交瘤细胞系,分别有6株属于IgG1亚型,2株为IgG2a亚型.通过制备腹水大量产生抗EV71大鼠单抗BC6并纯化,其对EV71的中和滴度为1∶32.BC6用于Western免疫印迹可特异检测大肠埃希菌表达的EV71 VP1重组蛋白和EV71样品中的VP1,用于ELISA可灵敏特异地定性或定量检测EV71抗原含量,用于IFA可特异识别被感染Vero细胞内的EV71颗粒,而对柯萨奇病毒A16型无交叉反应.结论 成功制备获得了大鼠抗EV71 VP1的特异性中和单抗,可应用于Western免疫印迹、ELISA、IFA等方法,成为灵敏特异地检测EV71 VP1或全病毒颗粒的有效工具.