CKIP-1负调控间充质干细胞成骨分化研究

目的:分析CKIP-1负调控间充质干细胞成骨分化作用.方法:敲除CKIP-1基因纯合子C57Bl/6小鼠5只,与野生型C57BL/L小鼠杂交,后代得到纯合的C57BL/L小鼠,通过PCR鉴定基因型,取C57BL/6(CKIP-1-/-)小鼠,获得骨髓间充质干细胞,进行鉴定,分析野生以及杂合小鼠骨髓增值率、ALP活性与染色结果;同时进行成骨相关蛋白表达检测、成骨相关基因表达检测.结果:能够区分杂交小鼠的基因,繁殖得到敲除基因纯合子小鼠,CKIP-1基因敲除小鼠基因正常的繁殖、生长发育能力;杂合小鼠的BMSCs细胞生生长速率低于野生小鼠,杂合小鼠GO/G1期比重高于野生小鼠,差异有统计学意义(P<0.05);杂合小鼠第0、1、3、5dMTT检测450nm处吸光度均值均低于野生小鼠,差异有统计学意义(P<0.05);杂合小鼠染色显示紫色结节明显较多,高于野生小鼠样本.杂合小鼠ALP活性、COL-Ⅰ、Runx-2、BMP-2、OCN表达量高于野生小鼠,杂合小鼠Smad1/GAPDH值低于野生小鼠,差异有统计学意义(P<0.05);两组小鼠成骨细胞均处于早期,未见成熟的成骨细胞;杂合小鼠BMP-2/GAPDH表达差值高于野生小鼠,杂合小鼠基因Runx-2表达量、ColⅠ表达量低于野生小鼠,差异有统计学意义(P<0.05).结论:敲除CKIP-1基因加速细胞凋亡,延长间充质干细胞增殖时间,降低增殖速度,但可增强ALP表达,提示CKIP-1基因是BMSCs向成骨细胞分化的负调控基因,可能与其对成骨蛋白的调节、相关基因的相互作用有关.