IGF1对BMSCs向成骨细胞分化的影响和机制研究

目的:分析胰岛素样生长因子(IGF-1)对BMSCs向成骨细胞分化的影响,并探讨其机制.方法:取4周龄清洁级雄性SD大鼠,进行大鼠原代BMSCs原代培养与鉴定与IGF1表达,分别采用全骨髓贴壁培养法、密度梯度离心法进行培养传代,绘制大鼠BMSCs生长曲线与检测细胞周期,鉴定纯度与向成骨细胞分化能力,同时检测大鼠原代BMSCsIGF1表达;取全骨髓贴壁法分离大鼠BMSCs,取P3代细胞,普通培养基所培养的BMSCs作为对照组.实验组总分别加入50、100、200、400ng/ml浓度.同时对实验组处理后第3、9、15日进行碱性磷酸酶染色实验与活性实验,第21进行Alizarin redS染色.结果:两种分离方法获得的P0细胞形态无显著差异,在P2-P3代的形态、细胞生长无显著变化、G0/G1期、G2/M期、S期占周期比重差异无统计学意义(P＞0.05)、生长曲线呈典型“S”型曲线;CD29/CD90表达阳性91.43％、CD34/CD45表达阳性率1.25％;全骨贴壁法获得P3代细胞经诱导后,增长速度明显下降,不成对数生长、ALP活性随着时间的推移呈上升趋势、AR染色半定量分析呈上升趋势,差异有统计学意义(P＜0.05);结果显示加载前后IGF1 mRNA表达无显著差异;不同剂量IGF1组多组间对比第3、9、15日的ALP活性与第第21dCd水平差异有统计学意义(P＜0.05),在各个时间段在100ng/ml组别内水平最高,第3日、第9日与第1 5日,100ng/ml、200ng/ml的ALP活性高于同期其它三组.结论:全骨髓贴壁培养法取得的骨髓细胞更多,是一种理想的EMSCs培养方法;力学刺激不会对IGF1表达产生显著影响;IGF1会影响大鼠原代BMSCc分化,与其促成骨作用有关,呈剂量相关性,干预量过大可能起到负面作用.