二氮嗪对软骨细胞氧化损伤的影响

目的：探讨二氮嗪对双氧水诱导的软骨细胞氧化损伤的影响。方法：取SD乳鼠膝关节软骨细胞进行原代培养，将对数生长期的软骨细胞分成5组，分别为阴性对照组（A组），双氧水组（B组），H2 O2＋0．1μmol·L-1二氮嗪组（C组），H2 O2＋1．0μmol·L-1二氮嗪组（D组），H2 O2＋10μmol·L-1二氮嗪组（E组）；A组细胞不做特殊处理，B组用0．3 mmol·L-1双氧水在37℃恒温箱内孵育4 h，C、D、E、F组预先分别用0．1μmol·L-1 DZ，1．0μmol·L-1 DZ，10μmol·L-1 DZ，100μmol·L-1在37℃的恒温箱孵育30分钟，PBS洗涤细胞，再用0．3 mmol·L-1双氧水在37℃恒温箱内孵育4小时。分别检测ABCDE各组细胞的细胞活性，ROS的量，细胞凋亡情况。结果：①MTT法检测各组细胞活性，细胞活性率从大至小依次为D组＞C组＞E组＞F组＞B组；②用活性氧探针DCFH-DA检测各组细胞中的ROS的量，ROS产量从多至少依次为B组＞E组＞D组＞C组＞A组；③流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况，各组细胞凋亡率由大至小依次为B组＞E 组＞D组＞C组。④Western bolt检测各组软骨细胞中HIF-1α蛋白的表达，各组软骨细胞中HIF-1α蛋白表达量依次为C组＞D组＞E组＞A组＞B组。结论：二氮嗪可降低双氧水诱导的软骨细胞的凋亡率，同时也降低双氧水诱导的软骨细胞ROS的产生，并诱导软骨细胞产生HIF-1α蛋白，可能存在二氮嗪诱导HIF-1α的表达，引起下游相关基因的转录，总体提高软骨细胞对氧化损伤的耐受力，阻碍自由基诱导的软骨细胞的凋亡。