黄芪甲苷通过诱导M1型巨噬细胞极化发挥抗肿瘤作用的机制

目的:探讨黄芪甲苷对巨噬细胞极化的影响及其可能的抗肿瘤免疫机制.方法:通过噻唑兰(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)比色法检测不同浓度黄芪甲苷作用不同时间,对巨噬细胞的细胞毒作用,以选取合适的黄芪甲苷作用浓度;将巨噬细胞与肿瘤细胞以1∶1进行共孵育,并用0.1mg· L-1黄芪甲苷作用24 h,通过虫荧光素酶(luciferase,Luc)杀伤实验检测巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤效率;以0.lmg· L-1黄芪甲苷作用巨噬细胞24 h,通过流式细胞术检测巨噬细胞CD16/32,CD206表达,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS),精氨酸-1(Arginine-1,Arg-1)及细胞因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12),白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10),转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)mRNA表达,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测巨噬细胞信号传导及转录激活因子1(Signal transducers and activators of transcription 1,STAT1),磷酸化信号传导及转录激活因子1(phosphorylationsignal transducers and activators of transcription 1,p-STAT1)表达.结果:当黄芪甲苷质量浓度为0.1mg· L-1时,对巨噬细胞无细胞毒作用.与空白组比较,Luc杀伤实验结果显示黄芪甲苷可以显著促进巨噬细胞介导的肿瘤杀伤;Real-time PCR结果显示黄芪甲苷可以诱导巨噬细胞表面M1型巨噬细胞标志CD16/32表达增高,促进M1型巨噬细胞特异性指标iNOS mRNA表达,同时诱导M1型巨噬细胞相关细胞因子IL-1β,TNF-α,IL-12 mRNA表达增高;Western blot结果显示黄芪甲苷可以促进巨噬细胞STAT1发生磷酸化.结论:黄芪甲苷可以通过促进巨噬细胞内STAT1发生磷酸化,进而诱导巨噬细胞向M1型巨噬细胞发生极化,并启动巨噬细胞相关的抗肿瘤免疫应答.