香附烯酮在Caco-2细胞模型中的转运机制分析

目的:考察香附烯酮在Caco-2细胞模型中的转运机制,为香附的临床应用提供实验依据.方法:通过噻唑蓝(MTT)比色法考察不同质量浓度香附烯酮对Caco-2细胞的毒性,以确定转运试验的给药浓度.以香附烯酮表观渗透系数(Papp)和累积转运量为评价指标,采用液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)测定香附烯酮的含量,色谱条件为流动相乙腈(A)-水(B)梯度洗脱(0～1.5 min,35％A;1.5～2 min,35％～90％A;2～4 min,90％A;4～4.1 min,90％～35％A;4.1～8 min,35％A),流速0.3 mL· min-,进样量1 μL,柱温30 ℃;质谱条件为电喷雾离子源(ESI),正离子模式,香附烯酮及内标物蛇床子素的检测离子分别为m/z 219.2 ～ 110.9,m/z 245.0～189.0.探讨了香附烯酮质量浓度、给药时间、乙二胺四乙酸(EDTA)及P-糖蛋白(P-gp)抑制剂对香附烯酮在体外细胞模型上跨膜转运的影响.结果:香附烯酮质量浓度处于3～90 mg·L-1时,孵育4h内对Caco-2细胞没有明显毒性.香附烯酮在Caco-2细胞模型中的转运存在一定的浓度及时间依赖性,其Papp ＞1 ×10-6cm·s-1,说明药物吸收良好,外排率处于0.5～1.5;加入细胞旁路转运抑制剂EDTA及P-gp转运体抑制剂维拉帕米后,双向Papp没有显著性差异.结论:香附烯酮在Caco-2细胞模型转运机制主要是被动扩散,细胞旁路转运及P-gp不参与其转运.