UPLC-DPPH-PAD-ESI-TOF/MS在线联用技术快速筛选丹参中的抗氧化成分

目的 建立超高效液相色谱-(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)-二极管阵列检测器-电喷雾飞行时间质谱联用技术(UPLC-DPPH-PAD-ESI-TOF/MS)快速筛选鉴别天然产物中抗氧化成分的方法,并用于丹参中抗氧化成分的快速发现.方法 采用WatersACQUITY UPLC HSS T3柱(100 mm×3.0 mm,1.8 μm),以乙腈-0.2％甲酸水进行梯度洗脱,体积流量0.35 mL/min实现丹参提取物的快速分析.柱后流出液与另一路DPPH溶液(0.3 mL/min)通过三通阀注入PEEK反应线圈(内径0.25 mm,长度10m)混合反应后流入检测器检测,检测波长为254和517nm,通过517nm下产生的负峰所对应的样品色谱峰来筛选丹参中的抗氧化成分.结果 采用UPLC技术在低体积流量下实现样品的高效分离,避免了高体积流量引起的基线噪音、显著提高了在线筛选方法的分辨率和灵敏度,降低了溶剂消耗.采用该方法在丹参提取物中共筛选出31个抗氧化活性成分,采用PAD-ESI-TOF/MS初步鉴定出11种,活性验证实验表明,咖啡酸、丹酚酸B、丹酚酸A、丹参素均具有较好抗氧化活性,其中,咖啡酸的DPPH半数清除浓度(IC50)值为29.00 μmol/L,明显优于阳性对照维生素C.结论 该方法分离速度快、分辨率和灵敏度较高、溶剂消耗低,为复杂天然产物中抗氧化成分的快速发现研究提供了方法和技术支持.