七叶皂苷A～D体外转化规律研究

目的 建立HPLC法同时测定七叶皂苷A～D量的方法,考察不同因素水平影响下七叶皂苷A～D的体外转化规律,并优化出最佳转化条件,为调控生产中七叶皂苷A～D的比例提供参考.方法 采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-0.05％磷酸水溶液(34:66)为流动相,柱温为35℃,体积流量为1.0 mL/min,检测波长为200 nm,外标法定量;以七叶皂苷A～D的转化率及有关物质的量为指标,通过单因素实验设计,考察pH值、温度、时间3个因素对七叶皂苷A～D体外转化的影响趋势,再采用中心组合设计-响应面法优选转化条件,利用Design Expert 8.0.5软件分析预测最佳转化条件并进行验证试验.结果 七叶皂苷A～D分别在0.39～3.49 mg/mL (r=0.999 5)、0.28～2.55 mg/mL (r=0.999 5)、0.19～1.67 mg/mL (r=0.999 7)、0.07～0.59 mg/mL (r=0.999 7)与峰面积呈良好的线性关系;单因素实验表明,pH值、温度、时间对七叶皂苷A和B、C和D转化率的影响呈现相似的趋势,在pH值5.0～10.0,温度45～85℃,时间0.25～8 h时,七叶皂苷A、B部分转化成七叶皂苷C、D,其他条件下七叶皂苷A～D均转化为有关物质;中心组合设计-响应面法研究得到最佳转化条件为pH值6.9,温度54℃,时间7.4 h,在此条件下,七叶皂苷C、D转化率的综合评分为11.50％,与预测值的偏差＜5％.结论 不同pH值、温度、时间影响下,七叶皂苷A～D的体外转化呈现出一定的规律,响应面法优选出的最佳转化条件稳定可行,可为调控生产中七叶皂苷A～D的比例提供科学的依据.