灯盏花MYB基因克隆及其荧光表达载体的构建

目的 克隆灯盏花MYB基因的全长序列,为解析灯盏花MYB基因的功能奠定基础.方法 根据灯盏花转录组的相关信息,利用RACE方法从灯盏花中克隆到一个可能参与灯盏花乙素合成的MYB基因,在对其cDNA序列、核苷酸序列的相似性、理化性质、疏水性、跨膜结构、二级结构及三级结构进行分析预测的基础上,对其进行多序列比对并构建系统树.同时,还构建了该基因与绿色荧光蛋白的融合表达载体,并进行了初步转化研究.结果 克隆获得灯盏花MYB基因,命名为ebMYB06,其开放阅读框为783 bp,编码260个氨基酸残基,相对分子质量为63 800,理论等电点(pI)为5.18,属稳定蛋白.其蛋白二级结构主要由无规卷曲、α-螺旋和β-折叠构成.根据灯盏花MYB与拟南芥MYB (AtMYB)的系统树比对分析结果,发现ebMYB基因与拟南芥中的AtMYB4、7、32、6、8和AtMYB 11、12、111 2亚群的基因聚类,推测所克隆基因在结构或功能上,可能与这两组具有共同性.实验还表明所构建的表达可用于灯盏花的高效转化.结论 首次从灯盏花中克隆到可能参与其苯丙烷代谢或环境响应调控的MYB基因.