迷迭香酸调节PD-1/B7-H1(PD-L1)信号通路对非小细胞肺癌细胞增殖的抑制研究

目的 探讨迷迭香酸调节PD-1/B7-H1(PD-L1)信号通路对非小细胞肺癌细胞增殖的抑制研究.方法 选取非小细胞肺癌细胞株A549细胞和H1299细胞,给予迷迭香酸0、50、100及200μmol/L进行干预培养24 h.CCK-8检测A549细胞和H1299细胞存活率;TUNEL法检测细胞凋亡率;Hoechst-33258染色实验检测细胞凋亡情况;ELISA试剂盒检测细胞上清液IFN-y、IL-7和IL-21含量表达.Western Blot法检测非小细胞肺癌株中PD-1、PD-L1、NF-κB、Bcl-2和Caspase-3的蛋白表达水平.结果 CCK-8检测A549细胞和H1299细胞存活率:随着迷迭香酸染毒剂量的增加,A549细胞存活率呈剂量依赖性显著降低,H1299细胞存活率呈剂量依赖性显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).TUNEL法流式细胞仪检测细胞凋亡:随着迷迭香酸染毒剂量的增加,A549细胞凋亡率显著增高,H1299细胞凋亡率显著增高,且呈剂量依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05).Hoechst-33258染色实验:对照组A549细胞和H1299细胞染色质形态完整均匀;在迷迭香酸的刺激下,A549细胞和H1299细胞中均表现出染色质边集成新月形、出现核固缩、核碎裂等特征性的细胞凋亡现象,随着迷迭香酸染毒剂量的增加,现象也更加明显,呈剂量依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05).划痕实验:A549细胞和H1299细胞在对照组表现为紧密连接的上皮样表型,在迷迭香酸的刺激下,A549细胞和H1299细胞转为疏松的间充质样表型,A549细胞和H1299细胞间距拉大,出现纺健状、梭形等改变,A549细胞和H1299细胞划痕愈合速度明显减弱,细胞迁移能力呈剂量依赖性减弱(P＜0.05).Transwell小室实验结果表明:A549细胞和H1299细胞过小室的数量呈剂量依赖性明显减少,侵袭能力呈剂量依赖性显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).Elisa试剂盒检测细胞上清液IFN-γ、IL-7和IL-21含量表达:随着迷迭香酸染毒剂量的增加,A549细胞内上清液IFN-γ、IL-7和IL-21含量显著降低,H1299细胞内上清液IFN-γ、IL-7和IL-21含量显著降低,且呈剂量依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05).Western Blot法检测非小细胞肺癌株中PD-1/B7-H1(PD-L1)信号通路蛋白表达水平:随着迷迭香酸染毒剂量的增加,A549细胞PD-1、PD-L1和Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),NF-κB和Caspase-3的蛋白表达水平显著升高且呈剂量依赖性,H1299细胞PD-1、PD-L1和Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),NF-κB和Caspase-3的蛋白表达水平显著升高且呈剂量依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 迷迭香酸下调PD-1/B7-H1(PD-L1)信号通路,可明显抑制非小细胞肺癌的细胞增殖,且呈剂量依赖性.