平目汤用药大鼠血清介导Graves眼病眼眶脂肪细胞凋亡途径的研究

目的:通过原代培养人眼眶前脂肪细胞,诱导分化为成熟脂肪细胞,研究平目汤促进眼眶脂肪细胞凋亡的作用及分子机制,探讨平目汤治疗非活动期Graves眼病发挥药效的可能作用靶点.方法:收集非活动期Graves眼病患者眼眶球后脂肪组织,共4例4只眼.通过组织块法对人眼眶前脂肪细胞进行分离和培养,观察细胞的形态,采用间接免疫荧光染色鉴定.诱导前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞,油红O染色鉴定.制备平目汤含药血清,配成终浓度分别为5％、10％、20％的平目汤低、中、高剂量组.油红O染色观察平目汤对前脂肪细胞诱导分化的影响;MTT法检测平目汤对眼眶前脂肪细胞活力的影响;流式细胞术测定平目汤对眼眶成熟脂肪细胞凋亡率的影响;检测平目汤对眼眶成熟脂肪细胞fas、fas L基因和蛋白表达的影响.结果:(1)采用组织块法培养的细胞呈梭形,增殖旺盛,间接免疫荧光检测证实为前脂肪细胞,可诱导分化为成熟脂肪细胞.(2)MTT结果显示,平目汤各组均可降低前脂肪细胞活力,其中作用显著的是平目汤中剂量组,呈时间依赖性地降低细胞活力.(3)流式细胞术结果表明,与空白对照组比较,平目汤各组细胞凋亡率均升高(P＜0.05),其中平目汤中剂量组早期凋亡率和总凋亡率最高,其次为平目汤低剂量组.(4)与空白对照组相比,除地塞米松组外,平目汤各组对眼眶脂肪细胞的fas、fas L基因和蛋白的相对表达量较空白对照组均有一定程度的升高,其中平目汤中剂量组fas、fasL mRNA表达水平与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),Fas蛋白表达以平目汤中剂量组最高,其次为平目汤低剂量组,Fas L蛋白表达以平目汤高剂量组最高,其次为平目汤中剂量组,但二者比较差异无统计学意义.结论:平目汤降低眼眶前脂肪细胞的活力,抑制前脂肪细胞向脂肪细胞的分化能力,可能通过死亡受体信号途径诱导fas、fasL活化,促进成熟脂肪细胞凋亡,进而减少眼眶脂肪细胞积聚而发挥疗效.