苦参碱抑制肺癌A549细胞增殖及诱导细胞自噬的研究

目的:研究苦参碱(matrine)对肺癌A549细胞增殖及自噬的影响.方法:应用matrine作用肺癌A549细胞后,MTT法检测细胞增殖活性;吖啶橙染色(AO)法在荧光显微镜下观察细胞自噬状态;蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达情况;GFP-LC3质粒转染实验观察细胞胞质中绿色点状聚集的自噬泡.结果:matrine可以显著抑制肺癌A549细胞的增殖(P＜0.01),随着给药时间和剂量的增加,matrine对肺癌细胞的生长抑制率显著上升,并呈一定的时间-剂量依赖关系.matrine作用于肺癌A549细胞48 h后,细胞内酸性滤泡染成亮红色荧光比例增多,其中以0.5 mg/mL和1.0 mg/mL浓度较为明显,蛋白质印迹法检测实验即选择0.5mg/mL和1.0 mg/mL作为实验浓度.与对照组相比,matrine0.5 mg/mL和1.0 mg/mL组LC3-Ⅱ/GAPDH蛋白表达水平均显著升高(P＜0.01);与matrine0.5 mg/mL组相比,matrine0.5 mg/mL+3-MA组LC3-Ⅱ/GAPDH蛋白表达水平显著下降(P＜0.01);与matrine1.0 mg/mL组相比,matrine1.0 mg/mL +3-MA组LC3-Ⅱ/GAPDH蛋白表达水平也显著下降(P＜0.01).GFP-LC3转染实验选择matrine1.0 mg/mL于肺癌A549细胞中进行验证,结果显示转染GFP-LC3质粒的细胞在1.0 mg/mL处理后,细胞胞质中出现绿色点状聚集的自噬泡,而正常培养组极少细胞有自噬泡形成;同时转染GFP-Control对照质粒的细胞在1.0 mg/mL处理及正常培养条件下均未观察到点状聚集的自噬泡产生.结论:matrine抑制肺癌A549细胞的增殖并诱导细胞发生自噬.