Nrf2点突变稳转肺癌细胞株构建及鉴定

目的 构建核转录因子Nrf2(nuclear factor erythroid 2 related factor 2,Nrf2)点突变逆病毒稳转细胞株,并检测其在A549人肺癌细胞中的表达效果,为基因靶向治疗提供研究基础.方法 针对人Nrf2基因序列,扩增目的片段并与Teasy载体连接,构建Nrf2-Teasy重组质粒,用Fast Mutagenesis System对Nrf2进行定点诱变,使其第2号外显子有T35C和G37A的点突变.并将突变的Nrf2片段插入逆病毒载体pMSCV,构建pMSCV-MUT-Nrf2重组质粒.利用逆病毒系统将其稳转入A549肺癌细胞,运用RT-PCR技术检测Nrf2 mRNA表达水平.结果 稳转后的A549目的细胞可观察到荧光,且其Nrf2 mRNA表达水平较未转染细胞显著增高.结论 成功构建点突变的逆病毒质粒,并有效感染目的细胞,为进一步研究Nrf2基因突变在肺癌中的作用提供细胞模型.