淫羊藿-仙茅药对调控miRNA-144保护高糖介导成骨细胞的作用机制

目的:探讨淫羊藿-仙茅(二仙)药对在miRNA水平保护高糖介导成骨细胞的作用机制.方法:建立高糖介导的成骨细胞模型;MTT法检测成骨细胞活性;生物信息学算法预测miR-144靶基因.RT-PCR检测miR-144和靶基因的mRNA表达.构建荧光索酶报告质粒,分析荧光素酶活性.将miR-144模拟物和抑制剂通过Lipofectamine 2000转染进高糖介导的成骨细胞.免疫印迹法检测胰岛素受体底物1(IRS1)蛋白表达.结果:二仙药对能提高高糖介导的成骨细胞活性,促进增殖;生物信息学提示IRS1是miR-144的靶基因.与对照组比较,模型组miR-144表达显著升高(P＜0.05),IRS1 mRNA表达水平显著降低(P＜0.01);二仙药对组抑制了这种变化.与阴性对照组比较,miR-144模拟物可显著抑制与IRS1 3'-UTR融合的荧光素酶报告基因的活性.模型组IRS1mRNA表达下调,二仙药对组表达相反,说明二仙药对能够上调转染miR-144模拟物或抑制剂的高糖成骨细胞中的IRS1 mRNA表达.在高糖成骨细胞模型中,转染miR-144模拟物组的IRS1蛋白表达均显著增加(P＜0.01),转染miR-144抑制剂后该蛋白表达显著降低(P＜0.01).二仙药对治疗后,IRS1蛋白表达显著增加.结论:miR-144在高糖介导的成骨细胞中能调控IRS1表达.二仙药对能下调或维持miR-144水平,增加IRS1 mRNA和蛋白表达.