花椒对利血平所致虚寒证大鼠骨骼肌Cox4i1表达及甲基化的影响

目的:探讨热性中药花椒对利血平所致虚寒证大鼠骨骼肌Cox4i1表达及甲基化的影响.方法:利血平作用于SD雄性大鼠造成虚寒证模型后,用花椒水煎剂按0.54、5.40g/kg剂量灌胃大鼠12d,取骨骼肌;Elisa法测定COX4I1蛋白浓度;Real-time PCR法检测大鼠骨骼肌中Cox4i1、Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b、Tet1、Tet2和Tet3基因mRNA表达水平;BSP法检测Cox4i1基因DNA甲基化状态;Western blot法检测骨骼肌中TET3和DNMT3A蛋白表达情况.结果:模型组COX4I1蛋白量和mRNA水平均比空白组显著增加(P＜0.01);花椒低、高剂量组能显著降低模型组大鼠Cox4i1 mRNA水平(P＜0.01,P＜0.05).模型组Cox4i1甲基化频率有降低趋势,且接近显著水平;花椒低剂量组能显著增加Cox4i1甲基化频率(P＜0.05).模型组Dnmt1、Tet1、Tet2 mRNA水平显著增加(P＜0.05);花椒低剂量组能显著降低Dnmt3a、Dnmt3b、Dnmt1、Tet1、Tet2和Tet3 mRNA水平(P＜0.05,P＜0.01);花椒高剂量组能显著降低Dnmt3b、Tet3、Tet2 mRNA水平(P＜0.05,P＜0.01).花椒高、低剂量组对于DNMT3A和TET3蛋白表达量均未有显著影响.结论:低剂量花椒可能通过同时降低DNA甲基化酶和去甲基化酶的表达水平,而发挥甲基化的作用,使Cox4i1 DNA甲基化频率增加,从而使mRNA水平降低.