养正散结汤对胃癌干细胞自我更新与分化的调控作用及机制研究

目的 探讨中药复方养正散结汤(Yangzheng Sanjie decoction,YZSJD)对胃癌干细胞(Gastric cancer stem cells,GCSCs)自我更新与分化的调控作用及其作用机制.方法 通过无血清悬浮培养法分离GCSCs,采用Western Blot法检测"干性"标志CD44、Oct-4、Nanog、Sox-2及相关靶基因c-Myc、Ras的蛋白表达;以细胞球连续传代实验检测GCSCs自我更新能力;采用免疫荧光法及流式细胞术检测GCSCs分化情况;采用实时荧光定量PCR法检测let-7a表达.结果 分离出的球囊细胞能在无血清培养基中连续传代,与亲本细胞比较,球囊细胞"干性"标志CD44、Oct-4、Nanog和Sox-2的表达均明显升高(P＜0.01);与GCSCs比较,GCSCs贴壁分化24、48、72 h后其分化标志CK18表达逐渐升高(P＜0.01).与空白对照组比较,养正散结汤组中CD44、Oct-4、Nanog、Sox-2及c-Myc、Ras蛋白表达均显著降低(P＜0.01),CK18、let-7a表达均显著升高(P＜0.01).空白对照组细胞球形成率为(16.46 ±0.32)％,养正散结汤1.0、2.0 mg·mL-1浓度组细胞球形成率分别为(2.83 ± 0.85)％、(0.17 ± 0.15)％,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 养正散结汤能上调let-7a抑制其靶基因c-Myc、Ras表达,抑制GCSCs自我更新、促进其分化,这可能是养正散结汤发挥抗癌作用的机制之一.