沙蟾毒精诱导人结肠癌细胞凋亡和自噬的体外研究

目的 研究沙蟾毒精对体外人结肠癌HCT116细胞和SW620细胞凋亡与自噬的影响及其相关作用机制.方法 以人结肠癌HCT116细胞和SW620细胞为靶细胞,以不同浓度(0、25、50、100、200 nM)的沙蟾毒精处理后,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测人结肠癌HCT116细胞和SW620细胞活力,采用倒置相差显微镜观察沙蟾毒精干预后HCT116细胞和SW620细胞的形态学改变,AnnexinV/PI流式细胞术检测人结肠癌细胞的凋亡情况,蛋白质免疫印迹法(WB)检测人结肠癌细胞凋亡相关蛋白、自噬相关蛋白及雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白的表达水平.结果 CCK-8法显示沙蟾毒精能显著抑制人结肠癌HCT116、SW620细胞增殖,并具有浓度与时间依赖性(P<0.05,P<0.01).流式细胞术检测结果显示,不同浓度(25、50、100 nM)的沙蟾毒精作用人结肠癌细胞48 h后,HCT116、SW620细胞凋亡率明显提高(P<0.05,P<0.01).WB检测结果显示,100 nM沙蟾毒精作用人结肠癌HCT116、SW620细胞48 h后,沙蟾毒精组酵母Atg6同系物(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ蛋白表达升高(P<0.01),P62、B淋巴细胞瘤-xl(Bcl-xl)、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(P-mTOR)抗体蛋白表达水平降低(P<0.05).与单独沙蟾毒精处理组比较,沙蟾毒精联合自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)作用人结肠癌HCT116、SW620细胞后,LC3-Ⅱ蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01),P62蛋白表达水平升高(P<0.01).结论 沙蟾毒精对人结肠癌细胞株生长具有显著的抑制作用,且具呈剂量和时间依赖性,同时沙蟾毒精可促进细胞凋亡与自噬,且可能通过mTOR通路发生自噬,可为结肠癌的治疗提供新的治疗策略.