益气活血方对静水压下兔椎间盘软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 观察兔椎间盘软骨细胞代谢及炎性因子表达与静水压强度、作用时间、药物的关系,揭示益气活血方延缓椎间盘退变可能的调控机制及作用靶点.方法 选用3月龄新西兰兔处死后无菌条件下取出腰椎间盘,分离出软骨细胞后分组,包括对照组、模型组和中药治疗组,将3组软骨细胞培养至第3代椎间盘软骨细胞后,加入益气活血方含药血清中,在体外静水压加载系统1Mpa压力下作用24小时后,利用倒置相差显微镜观察软骨细胞传代过程中细胞形态的变化,使用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR法)检测相关炎症因子环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)及蛋白酶[基质金属蛋白酶-3(Matrix Metalloproteinase-3,MMP-3)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-1,TIMP-1)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan,AGC)]的基因表达程度,运用蛋白印迹法(Western Blot法)检验3组软骨细胞中Wnt配体(Wingless4,Wnt4)、β-连环蛋白(β-catenin,β-CAT)表达水平及相关蛋白[蛋白多糖(Proteoglycans,PG)、胶原蛋白(Collagen,COII)]的表达.结果 与对照组比较,持续静水压下模型组Wnt4、β-catenin含量表达明显增高(P<0.05),MMP-3、COX-2及相关蛋白表达也表现出分解代谢倾向;与模型组比较,中药组Wnt4、β-catenin含量表达明显降低,TIMP-1和相关蛋白表达水平升高,COX-2水平下降(P<0.05),延缓椎间盘软骨细胞的退变.结论 益气活血汤可以提高静水压下椎间盘软骨细胞增殖率,减少软骨细胞的坏死和凋亡,可能经过下调Wnt/β-catenin信号通路,降低兔椎间盘终板软骨中Wnt4、β-catenin蛋白含量表达,从而延缓椎间盘退行性改变.