臭牡丹不同提取物的抗肿瘤活性筛选及其对裸鼠移植瘤中EMT相关蛋白的影响

目的:比较臭牡丹不同提取部位的抗肿瘤作用及其作用机制.方法:根据前期研究结果,采用乙酸乙酯、石油醚萃取、大孔树脂纯化方法,将臭牡丹苯乙醇苷类、黄酮类、萜类成分进行分离提取并纯化.建立CCK8、划痕试验、Transwell侵袭小室经典的抗肿瘤药理模型,检测臭牡丹三大活性部位对人肺腺癌A549体外增殖、迁移、侵袭的影响.并通过建立A549裸鼠移植瘤模型,检测各组裸鼠癌组织与癌旁组织中β-连环蛋白(β-catenin)、波形蛋白(Vimentin)、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadhefin)、糖原合成酶激酶-3 (GSK-3β)、磷酸化糖原合成酶激酶-3蛋白(p-GSK-3β)蛋白的表达水平.结果:苯乙醇苷部位以类叶升麻苷和异类叶升麻苷为对照,峰面积归一化法测得苯乙醇含量为88.93％;黄酮类部位以芦丁为对照,紫外分光度法测得黄酮含量均值为60％;萜类以齐墩果酸为对照品,紫外分光光度法测得石油醚部位萜类成分含量为50.99％.CCK8法测得臭牡丹苯乙醇苷、黄酮、萜类成分的IC50平均值分别为0.125、0.46、1.43 mg/ml.划痕试验测得臭牡丹苯乙醇苷、黄酮、萜类成分的24 h愈合率分别为14.6％、16.9％、19.9％;48 h愈合率分别为22.4％、20.4％、29.7％,均明显降低(P＜0.01).与模型对照组相比,Transwell侵袭小室试验显示各药物干预组的穿膜细胞数均显著降低(P＜0.01),0.4 mg/ml黄酮组与0.15 mg/ml苯乙醇苷组尤为显著.体内实验中,模型对照组瘤组织中的β-catenin、Vimentin蛋白表达增强(P＜0.01),E-cadherin、GSK-3 β、p-GSK-3 β蛋白表达明显下调(P＜0.05或P＜0.01).与模型对照组比较,臭牡丹0.2 g/kg组能下调瘤组织中的β-catenin、Vimentin蛋白表达(P＜0.05),上调GSK-3 β、p-GSK-3β (P＜0.05)蛋白表达.结论:臭牡丹苯乙醇苷、黄酮、萜类成分均对人肺腺癌A549细胞的增殖、迁移与侵袭具有一定的抑制作用,其中苯乙醇苷部位、黄酮部位对A549细胞体外抑制作用均明显,且具量效关系.萜类部位显示出的抗肿瘤作用不突出,可能与其纯度有关.臭牡丹提取物的抗肿瘤作用可能是通过调节瘤组织中β-catenin、Vimentin、E-cadherin、GSK-3 β、p-GSK-3 β蛋白的表达从而阻断肿瘤局部的上皮间质转化(EMT)而起作用.