蟾毒灵通过基质金属蛋白酶抑制人结肠癌细胞HCT116的侵袭和迁移

目的:研究蟾毒灵对人结肠癌细胞 HCT116侵袭和迁移能力的作用并对其分子机制进行探讨.方法:将人结肠癌 HCT116按对照组(野生型细胞) 、蟾毒灵处理组( 0. 125, 0. 25,0. 5,1,2 μmol/L)和顺铂(DDP)组分组,采用CCK-8法 检测蟾毒灵对人结肠癌细胞 HCT116增殖的抑制作用,采用细胞侵袭小室法( Transwell)法检测蟾毒灵对 HCT116 细胞侵袭和迁移能力的影响,采用蛋白质免疫印迹法( Western-blot)检测经蟾毒灵处理 HCT116 细胞 24 h 后基质金属蛋白酶-2( matrix metalloproteinases-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制因子-2( tissue inhibitors of metalloproteinases-2,TIMP-2)的蛋白表达情况,采用实时荧光定量 PCR( RT-PCR)检测蟾毒灵处理的 HCT116中 MMP-2、TIMP-2的 mRNA 表达情况.结果:①CCK-8实验结果 显示,蟾毒灵( 0. 125,0. 25,0. 5,1, 2 μmol/L ) 能 显 著 抑 制 结 肠 癌 细 胞 HCT116 的 增 殖( P<0. 05) ,并呈时间和剂量依赖性.②Transwell 实验结果 表明,与对照组对比,蟾毒灵( 0. 25,0. 5,1 μmol/L)对结肠癌细胞 HCT116的侵袭和迁移能力具有不同程度的抑制作用( P<0. 01) .③Western-blot实验结果 表明,与对照组对比,蟾毒灵能够明显下调 MMP-2,上调 TIMP-2 蛋白的表达水平,并呈一定的量效关系(P<0. 01).④RT-PCR 结果 显示,与对照组对比,蟾毒灵能够显著下调 MMP-2 mRNA,并上调TIMP-2mRNA的表达.结论:蟾毒灵能明显抑制结肠癌细胞HCT116的侵袭和迁移,其机制可能与上调 TIMP-2的表达,下调 MMP-2的表达水平有关.