当归咖啡酸-O-甲基转移酶在大肠杆菌中的表达及组织表达分析

目的 研究当归咖啡酸-O-甲基转移酶(AsCOMT)在大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中的表达,以及AsCOMT基因在当归抽苔植株和紫外线(UV)-B辐射胁迫下不同组织中的表达.方法 基于前期克隆的AsCOMT基因全长cDNA序列,利用双酶切技术构建pGEX-4T-3-AsCOMT原核表达载体,将其转化至E.coli BL21 (DE3)中,优化重组蛋白诱导表达条件,通过聚丙烯酰胺凝胶制备试剂盒(SDS-PAGE)电泳检测;并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析AsCOMT在当归抽苔植株和UV-B辐射胁迫下不同组织中的表达模式.结果 异源表达得到重组蛋白分子量为40 KDa,大小与预测分子量一致,AsCOMT蛋白主要以包涵体形式存在.qRT-PCR分析显示,抽苔当归茎中COMT的表达量显著高于其他组织(P＜0.05);UV-B辐射胁迫下,茎和叶中AsCOMT基因的表达水平差异有统计学意义(P＜0.05),即随UV-B辐射增强,AsCOMT基因的表达量在茎和叶中呈先增加后减少的趋势,而在根中无明显变化.结论 AsCOMT在不同组织和处理下表达水平存在差异,且在E.coli中成功表达,为后期深入研究当归阿魏酸生物合成调控研究奠定了基础.