温阳健脾祛痰颗粒含药血清对非酒精性脂肪性肝病细胞模型TLR4/TRIF/NF-κB通路的影响

目的 研究温阳健脾祛痰颗粒(WYJPQT)含药血清对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型的影响,初步探讨其作用机制. 方法 0.25 mM油酸诱导HepG2细胞24 h,油红O染色和三酰甘油检测确定NAFLD细胞模型成功建立,将NAFLD细胞模型分为WYJPQT高、中、低剂量组,阳性对照组及模型组,同时设置空白对照组.随后进行含药血清的制备,WYJPQT高、中、低剂量组分别给予10％ WYJPQT高、中、低剂量组合药血清培养基孵育48 h,阳性对照组给予10％多烯磷脂酰胆碱含药血清培养基孵育48h,模型组和空白对照组给予10％大鼠血清培养基孵育48 h后,进行油红O染色,细胞内三酰甘油含量测定,并应用逆转录-实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)和蛋白印迹法(Western blot)分别检测Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88 (MYD88)、Toll样白介素-1受体结构域适配子诱导干扰素-b(TRIF)和核因子κB(NF-κB)mRNA和蛋白表达水平. 结果 含药血清干预48h后,油红O染色提示WYJPQT高、中、低剂量组降低TG的作用细胞内脂滴颗粒较模型组减少,TG含量较模型组明显降低(P＜0.05),低剂量组与阳性对照组相当(P＞0.05);高、中剂量组TRIF蛋白相对表达量较模型组明显减少(P＜0.01),高剂量组TRIF蛋白表达量与阳性对照组相当(P＞0.05);WYJPQT各剂量组NF-κB mRNA和蛋白相对表达量均较模型组显著减少(P＜0.01);WYJPQT高、中剂量组TLR4 mRNA相对表达量较模型组和阳性对照组明显降低(P＜0.05). 结论 WYJPQT合药血清可调控TLR4/TRIF/NF-κB信号通路,降低NAFLD细胞模型中的脂滴颗粒数量,减少TG含量,达到对NAFLD细胞模型的治疗作用.