日本血吸虫成虫可溶性蛋白和重组半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白抑制小鼠结肠炎的研究

目的 探讨日本血吸虫可溶性成虫蛋白(SjSWP)和重组半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白(rSjcystatin)对模拟炎症性肠病的小鼠结肠炎的作用. 方法 24只BALB/c雌鼠分为健康对照组、磷酸盐缓冲液组(PBS组)、rSjcystatin治疗组(rSjcystatin组)、SjSWP治疗组(SjSWP组).PBS、rSjcystatin、SjSWP组用0.1ml 5％2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠诱导结肠炎,灌肠后6、24 h分别腹腔注射100 μl PBS、50 μg rSjcystatin、50μgSjSWP;健康对照组在相应时间点用等量的PBS灌肠及腹腔注射.TNBS灌肠72 h后无痛处死各组小鼠,检测宏观评分、结肠长度、髓过氧化物酶活性和显微镜下微观评分来评估炎症参数和病理改变.流式细胞仪检测小鼠脾脏中Th1和Th2及T调节细胞(Tregs)的比例.ELISA检测小鼠结肠组织匀浆上清中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、IL-13、IL-10等炎性细胞因子的水平.多组计量资料分析采用单因素方差分析,多组均数间的两两比较用Student-Newman-Keuls检验. 结果 TNBS诱导的结肠炎小鼠表现出明显的炎症和病理学特征,表现为体质量下降,便血、腹泻、结肠缩短、溃疡,以及炎性细胞因子IFN-γ、炎性细胞浸润和髓过氧化物酶活性的增加.与PBS组相比,rSjcystatin和SjSWP的干预治疗可以显著改善TNBS诱导的结肠炎症,表现为宏观评分(改善结肠糜烂、黏连、溃疡和缩短)和微观评分(减少组织损伤和炎症)的降低.健康对照组、PBS组、rSjcystatin组和SjSWP组小鼠结肠的宏观评分分别为0、9.8±0.8、4.3±1.0和4.5±1.4,微观评分分别为0、6.0±0.4、2.2±0.5和2.8±0.6,rSjcystatin组、SjSWP组与PBS组相比差异均有统计学意义(F=57.8、34.1,P＜ 0.01),rSjcystatin组与SjSWP组间差异均无统计学意义(P＞0.05).健康对照组、PBS组、rSjcystatin组和SjSWP组髓过氧化物酶分别为0.3±0.0、1.4±0.1、0.6±0.1和0.6±0.1 (F=32.5,P＜0.01);脾脏Tregs比例分别为(4.4±0.7)％、(8.2±3.1)％、(18.4±2.1)％和(13.4±1.9)％ (F=8.3,P＜0.01);结肠组织匀浆上清中IFN-γ、IL-10水平分别为(952.0±61.1)、(1 684.6±158.3)、(1 092.0±81.9)、(1 001.6±111.2) pg/ml,(322.8±27.4)、(399.3±77.9)、(860.6±153.6)、(892.0±113.8) pg/ml (F=9.6、8.3,P＜0.05);与PBS组相比,rSjcystatin与SjSWP组的INF-γ、髓过氧化物酶活性明显减低,Tregs应答增强,IL-10分泌增多,差异均有统计学意义(P＜ 0.01),rSjcystatin组与SjSWP组间差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 SjSWP及rSjcystatin均可通过上调小鼠Treg和Th2介导的免疫应答,减轻小鼠实验性结肠炎,抑制导致结肠炎发病的Th1免疫应答.