云南省西南地区福寿螺CO Ⅰ基因序列单核苷酸多态性分析

目的 为了解云南省西南地区福寿螺的种群结构,对当地福寿螺的细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ(cytochrome c oxidase subunit Ⅰ,COⅠ)基因序列进行单核苷酸多态性分析. 方法 2016年11月18日至2017年5月8日,于云南省西双版纳州景洪市和勐腊县、普洱市思茅区和西盟县、临沧市耿马县及德宏州瑞丽市6个调查点采集福寿螺,进行形态学观察.提取福寿螺基因组DNA,PCR扩增CO Ⅰ基因,对将阳性PCR产物进行测序.采用MEGA 6.06软件进行序列特征分析、计算遗传距离.采用邻接法构建系统发育树. 结果 共采集福寿螺200只,无法通过形态学鉴定进行种类区分.PCR扩增获得129条CO Ⅰ基因序列(小管福寿螺Pomaceacanaliculata 123条,孤岛福寿螺P.insularum 6条),经多序列比对排齐后长度为621 bp,存在76个核苷酸变异位点,76个简约信息位点,无单一变异、插入和缺失位点、无碱基转换和颠换,A、G、T、C的平均含量分别为23.1％、20.5％、39.8％和16.7％;编码的207个氨基酸残基中,保守氨基酸有203个(占98.1％).CO Ⅰ基因序列分属4个单倍型(HAP) ——HAP-1、HAP-2、HAP-3和HAP-4.HAP-1频率最高,占71.3％ (92/129),其次是HAP-3,占17.8％ (23/129),HAP-2和HAP-4频率分别为6.2％ (8/129)和4.7％ (6/129).HAP-1、HAP-2和HAP-3与小管福寿螺的遗传距离最短,为0～0.052,碱基差异数为0或31个;与锥形瓶属(Pila conica)的遗传距离最长,为0.214～0.239,碱基差异数为115～126个.HAP-4与小管福寿螺、孤岛福寿螺和锥形瓶属遗传距离分别为0.100、0.060和0.223,碱基差异数为57、35和119个.4个单倍型间的遗传距离为0.021 ～0.100,碱基差异数为13 ～57个.其中,HAP-1和HAP-2的遗传距离最近,为0.021;HAP-4与HAP-1、HAP-2和HAP-3的遗传距离最远,为0.100;HAP-3与HAP-1和HAP-2的遗传距离处于中间水平,为0.052.HAP-1、HAP-2和HAP-3与小管福寿螺基因序列(GenBank登录号为AB433769、KT313034、EU523129)的一致性为98％～ 100％;HAP-4与孤岛福寿螺基因序列(GenBank登录号为EF514942)的一致性为99％. 结论 云南省西南地区存在小管福寿螺和孤岛福寿螺2种,且小管福寿螺已产生一定的遗传分化.