山奈酚激活mTOR通路对心肌细胞缺氧损伤的保护作用

目的:山奈酚(KPF)是一类黄酮类化合物,具有多种药理作用.本文旨在研究山奈酚对人缺氧心肌细胞(H9C2)的保护机制.方法:采用二氯化钴(CoCl2)处理心肌细胞,模拟心肌细胞缺氧模型,用三组浓度的山奈酚处理缺氧心肌细胞,细胞分为5组:对照组(H9C2),模型组(Hypoxia),处理组(KPF 5μmol/L、KPF 10μmol/L、KPF 20μmol/L)进行后续实验;CCK-8检测各组H9C2细胞增殖倍数;Hoechst染色试剂盒检测细胞凋亡;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;蛋白免疫印迹检测细胞自噬相关蛋白表达水平.结果:结果表明,与对照组(H9C2)相比,CoCl2明显抑制H9C2细胞增殖,促进H9C2细胞凋亡,增加MDA含量,降低SOD活性,促进H9C2细胞过度自噬,表现为:LC3-Ⅰ转化为LC3-Ⅱ增加和上调自噬相关标志物Beclin 1,下调P62.与模型组(Hypoxia)相比,山奈酚以剂量依赖的方式对抗CoCl2诱导的各种生物学效应.通过分析mTOR信号关键蛋白ULK1和mTOR,发现山奈酚可以抑制ULK1蛋白活性,从而激活mTOR信号通路,抑制自噬.结论:本研究表明山奈酚通过激活mTOR通路促进CoCl2诱导的缺氧心肌细胞增殖,抑制缺氧心肌细胞凋亡,降低ROS水平和抑制自噬,且山奈酚可体外保护CoCl2诱导的缺氧心肌细胞.