沉默CD276基因促进宫颈癌Caski细胞的凋亡及作用机制研究

目的:探究免疫共刺激分子CD276在宫颈癌细胞(Caski、Hela)和人源胚胎肾细胞(293T)中的表达量,以及靶向沉默CD276基因来研究CD276对宫颈癌Caski细胞增殖、凋亡影响以及作用机制.方法:荧光定量PCR(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western blot)检测CD276在293T、Caski、Hela细胞的表达情况.通过脂质体Lipofectamine 2000体外转染control siRNA和CD276 siRNA至宫颈癌Caski细胞中,实验分为对照组、空转染组、CD276 siRNA组,采用Western blot检测Caski细胞中CD276蛋白的表达量.用细胞计数法(CCK-8)、膜联蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)&碘化丙啶(PI)双染法检测Caski细胞的增殖、凋亡,酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养液上清中IL-8、血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白水平.结果:免疫共刺激分子CD276在Caski、Hela细胞中的表达量显著高于293T细胞(0.754±0.068 vs 0.261±0.032;0.852±0.087 vs 0.279±0.026;P<0.05);Caski细胞中的表达量显著高于Hela细胞(P<0.05).与对照组相比,CD276 siRNA组细胞中CD276蛋白的表达量明显降低(0.235±0.028 vs 0.863±0.091,P<0.05),显著抑制细胞的增殖(0.326±0.035 vs 0.659±0.068,P<0.05),诱导其凋亡[(23.487±2.579)％vs(5.489±0.632)％,P<0.05],下调IL-8(43.257±3.612 vs 125.369±18.478)、VEGF(136.751±13.269 vs 369.254±28.157)的蛋白水平(P<0.05).结论:CD276在宫颈癌细胞中的表达量显著增加,沉默CD276基因的表达,明显抑制Caski细胞的增殖,促进其凋亡,其作用与IL-8、VEGF的蛋白水平有关.