IDH1单克隆抗体的制备及表位鉴定和双抗体夹心ELISA的建立

目的:制备抗异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)单克隆抗体,并确定其识别IDH1的表位区域,在此基础上建立双抗体夹心ELISA法,为检测人外周血IDH1蛋白奠定基础.方法:用原核表达的IDH1-GST蛋白免疫Balb/c小鼠,经常规细胞融合技术和ELISA筛选获得抗IDH1的单抗克隆.构建并表达IDH1的不同截短体融合蛋白,用Western blot和ELISA检测不同单抗与不同截短体蛋白的反应.通过双抗体夹心ELISA进行两两配对,获得有较好检测效果的配对抗体.结果:通过GST-IDH1和GST蛋白的ELISA双筛和Western blot的进一步鉴定,获得了8株抗IDH1的单克隆抗体,分别命名为1H8、4H7、5C8、7C3、7E12、13F6、16B11和16H7;5C8和7C3抗体识别的抗原表位位于IDH1119～197位氨基酸;4H7的识别表位位于197～211位氨基酸,7E12和16B11的识别表位位于211～314位氨基酸,1H8和16H7的识别表位位于314～329位氨基酸,13F6的识别表位位于314～415位氨基酸.在双抗体夹心配对实验中,1H8包被抗体,4H7作为检测抗体,可获得相对较高的检测敏感性.结论:制备获得了8株抗IDH1特异性单克隆并鉴定了各自的抗原表位识别区域,初步建立了ELISA双抗体夹心检测法,为后续外周血中IDH1的检测奠定了基础.