梅毒螺旋体黏附素Tp0751核酸菌影的构建及免疫原性研究

目的:构建梅毒螺旋体(Tp)黏附素Tp0751的重组真核大肠埃希菌菌影(EBG)并检测其在免疫鼠中的免疫原性,为探讨新型梅毒疫苗奠定基础.方法:构建pcDNA3.1(+)/Tp0751真核表达载体,将其装载入已构建的空EBG中,形成重组核酸菌影pcD/Tp0751-BG,计算装载率;将核酸菌影转染鼠源性巨噬细胞RAW264.7,Western blot(WB)鉴定目的蛋白表达.将雌性BALB/c鼠随机分为A(PBS)、B(空EBG)、C(空pcDNA3.1)三个对照组和D(pcD/Tp0751)、E(pcD/Tp0751-BG)、F(pcD/Tp0751-BG+rTp0751)三个实验组,各组间隔两周肌注免疫共三次,检测特异性血清IgG及生殖道黏膜SIgA、小鼠脾细胞增殖水平和分泌IFN-γ水平.结果:重组真核质粒对菌影的装载率为76.1%;WB显示此转染细胞能有效表达重组目的蛋白.D、E、F实验组小鼠特异性血清IgG与生殖道SIgA效价均随免疫次数增加而增加,各时间点均显著高于三个对照组(P<0.01),于末次加免后第8周达到峰值,此时F组IgG与SIgA效价分别为1:102400与1:12800;首次加免2周后,E、F组均显著高于D组(P<0.01);末次加免2周后,F组显著高于E组(P<0.01).末次加免后第8周,D、E、F组的刺激指数(SI)值与IFN-γ水平均分别显著高于三个对照组(P<0.01);E、F组均分别显著高于D组(P<0.01);F组分别均高于E组(P<0.05).结论:Tp0751真核质粒菌影具有良好的免疫原性,在小鼠体内诱生了有效的系统和黏膜的体液应答以及系统细胞免疫应答;异源加免较同源加免免疫效果更好.