金黄色葡萄球菌肠毒素C3过表达慢病毒载体的构建及鉴定

目的：构建金黄色葡萄球菌肠毒素C3（SEC3）过表达慢病毒载体并体外检测其表达目的基因。方法：聚合酶链反应（PCR）扩增SEC3基因片段；用AgeI 酶切线性化GV365慢病毒载体，通过连接反应构建GV365-SEC3载体，运用PCR方法鉴定阳性克隆载体；转染293T 细胞包装慢病毒，观察细胞荧光及Western blot 检测慢病毒载体表达，HIV-1 p24 ELISA 法测定慢病毒载体滴度。结果：获得目的基因，并成功构建GV365-SEC3慢病毒载体，通过PCR 及DNA 测序鉴定，证明GV365-SEC3质粒构建正确；转染293T 细胞后可观察到大量荧光细胞，经蛋白电泳得到29 kD 大小的蛋白条带，与目的基因蛋白相符合，ELISA 检测病毒载体滴度为5×108 TU／ml。结论：成功构建GV365-SEC3过表达慢病毒载体，为后期研究其体内外对抗肿瘤的作用与机制奠定基础。