金黄色葡萄球菌肠毒素C3过表达慢病毒载体的构建及鉴定
wf(2016)
Abstract
目的:构建金黄色葡萄球菌肠毒素C3(SEC3)过表达慢病毒载体并体外检测其表达目的基因。方法:聚合酶链反应(PCR)扩增SEC3基因片段;用AgeI 酶切线性化GV365慢病毒载体,通过连接反应构建GV365-SEC3载体,运用PCR方法鉴定阳性克隆载体;转染293T 细胞包装慢病毒,观察细胞荧光及Western blot 检测慢病毒载体表达,HIV-1 p24 ELISA 法测定慢病毒载体滴度。结果:获得目的基因,并成功构建GV365-SEC3慢病毒载体,通过PCR 及DNA 测序鉴定,证明GV365-SEC3质粒构建正确;转染293T 细胞后可观察到大量荧光细胞,经蛋白电泳得到29 kD 大小的蛋白条带,与目的基因蛋白相符合,ELISA 检测病毒载体滴度为5×108 TU/ml。结论:成功构建GV365-SEC3过表达慢病毒载体,为后期研究其体内外对抗肿瘤的作用与机制奠定基础。
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Key words
Staphylococcus aureus enterotoxin C3,Lentiviral,Vector construction,Over-expressing
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