人睾丸特异性新基因hTSC29合成肽单克隆抗体制备与鉴定

目的：制备和初步鉴定人睾丸特异性新基因hTSC29（ GenBank 登录号： BC032957）合成肽的单克隆抗体（ mAb）。方法：利用生物信息学方法对hTSC29的蛋白质序列进行分析和预测，根据免疫原性、表露性、亲疏水性及柔韧性4个参数，合成一段由18个氨基酸组成的多肽，并以此为抗原免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合后，通过有限稀释法筛选阳性克隆，采用ELISA法、Western blot、免疫组化和免疫荧光法鉴定hTSC29 mAb的特异性。结果：获得了1株稳定分泌hTSC29 mAb的杂交瘤细胞株，分泌的抗体属IgG2b（κ）亚型，杂交瘤细胞培养上清效价达到1∶104；Western blot鉴定表明，制备hTSC29 mAb可特异性地识别人睾丸总蛋白中Mr约为60000处的蛋白；免疫组织化学和免疫荧光结果显示hTSC29蛋白主要定位在正常人睾丸组织中的精母细胞和精子细胞。结论：成功建立了1株稳定分泌抗hTSC29 mAb的杂交瘤细胞株，其分泌的抗体效价高、特异性强，为进一步研究hTSC29的功能提供了特异的检测工具。