结核分枝杆菌Hsp16.3刺激小鼠巨噬细胞向M2分化

目的:探讨结核分枝杆菌热休克蛋白16.3 ( Mycobacterium tuberculosis heat shock proteins 16.3 ,MTB Hsp16.3 )在体外细胞水平对小鼠骨髓来源M1型巨噬细胞的影响作用. 方法:从BALB/c小鼠的胫股骨中取骨髓细胞,与GM-CSF共培养获取骨髓来源的M0型巨噬细胞,流式检测CD11b和F4/80的表达;分别用IFN-γ、IL-4诱导M0型巨噬细胞,光镜下观察细胞形态,荧光定量PCR、ELISA检测各组细胞IL-12、TNF-α、iNOS、IL-10、TGF-β、Arg-1的表达情况,构建小鼠骨髓来源M1/M2型巨噬细胞的技术平台;用MTB Hsp16.3刺激M0、M1型巨噬细胞,分别孵育24、48、72、96 h,采用ELISA、qRT-PCR检测不同时间点细胞培养液上清和细胞内的IL-12、TNF-α、iNOS、IL-10、IL-4、TGF-β、Arg-1的表达情况. 结果:光镜下观察M0型巨噬细胞形态不规则,细胞伪足较短;M1型巨噬细胞形状呈长梭形,并有伪足伸出现,突触很长;M2型巨噬细胞伪足较短,细胞整体形态较为收拢. FCM检测有90%以上的骨髓细胞细胞具有CD11 b和F4/80双阳性的特征. ELISA和qRT-PCR检测发现,M1型巨噬细胞高表达IL-12、TNF-α、iNOS;M2型巨噬细胞高表达IL-4、TGF-β、IL-10、Arg-1. MTB Hsp16.3 刺激巨噬细胞后,M0和M1型巨噬细胞均高表达IL-10、TGF-β,低表达TNF-α、iNOS,且在48-72 h增加或降低的水平达到峰值. 结论:成功诱导了小鼠骨髓来源的M1 、M2型巨噬细胞;MTB Hsp16.3促进M1型巨噬细胞高表达M2型相关的细胞因子,可促进M1型巨噬细胞向M2型样巨噬细胞转换.