HE4两种融合蛋白的基因构建和原核表达

目的：构建人附睾蛋白4（ HE4）的原核表达系统，纯化重组蛋白并检测其活性。方法：提取卵巢透明癌细胞总RNA，利用RT-PCR技术扩增HE4基因，分别构建pGEX-4T-1-HE4和PET26b-HE4两种原核表达系统。以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（ IPTG）诱导重组蛋白表达，最后采用SDS-PAGE和HE4商品化免疫分析试剂盒对表达产物进行鉴定。结果：成功构建了两种HE4融合蛋白的重组表达质粒，表达产物经SDS-PAGE鉴定，分别在相对分子量约38000处和12000处见到表达条带，并可与HE4单克隆抗体特异性结合。结论：采用原核表达方法获得了HE4的两种融合蛋白，为下一步开发免疫分析诊断试剂奠定了基础。