体外共培养模式下神经干细胞对视网膜小胶质细胞生物学功能的影响

目的:通过构建体外共培养体系,探讨神经干细胞(NSCs)对脂多糖(LPS)活化后的视网膜小胶质细胞(RMG)生物学功能的影响及TIMP1/MMP9途径在其中的可能作用.方法:采用振荡分离法获取C57/BL6小鼠原代RMG,通过免疫荧光技术检测细胞Iba1的表达对其进行鉴定.采用含有LPS的培养基(终浓度为1μg·mL-1)刺激RMG 24h后,将其分为LPS对照组、NSCs组、TB-NSCs组,其中NSCs组将RMG与NSCs共培养24 h,TB-NSCs组将RMG与用中和性抗体封闭TIMP1的NSCs共培养24h;同时,未予以LPS刺激的RMG作为空白对照组.采用免疫荧光技术检测各组RMG的Ki67表达情况,观察其增殖能力;TUNEL技术检测各组RMG凋亡情况;ELISA方法检测各组RMG上清液中TNF-α、IL-1β的蛋白质量浓度.结果:采用振荡分离法获取的原代RMG经免疫荧光染色鉴定Iba1呈阳性.NSCs组Ki67阳性率较LPS对照组降低(P＜0.05),而TB-NSCs组Ki67阳性率较NSCs组升高(P＜0.05).NSCs组TUNEL阳性率较LPS对照组明显升高(P＜0.05),而TB-NSCs组TUNEL阳性率与NSCs组间差异无统计学意义(P＞0.05).空白对照组、LPS对照组、NSCs组、TB-NSCs组RMG上清液中TNF-α蛋白质量浓度分别为(2.10± 0.65)、(25.69±2.01)、(20.01±1.63)、(23.76±1.45)ng·mL-1,总体比较差异显著(FTNF-α=302.65,PTNF-α＜0.05);IL-1β蛋白质量浓度分别为(1.77± 0.74)、(15.38±1.18)、(10.88± 0.95)、(13.45± 1.41)ng·mL-1,总体比较差异非常显著(FⅡ,18=179.84,PIL-1β＜0.05);其中,NSCs组TNF-α及IL-1β蛋白质量浓度均较LPS对照组显著降低(P＜0.05),TB-NSCs组TNF-α及IL-1β蛋白质量浓度较NSCs组明显升高(P＜0.05).结论:体外共培养模式下,NSCs可抑制RMG增殖能力,提高其凋亡水平,并抑制其分泌促炎因子TNF-α及IL-1β,该效应可能与调控TIMP1/MMP9相关.