CDA基因沉默对人慢性髓系白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨胞苷脱氨酶(CDA)基因沉默在治疗人慢性髓系白血病(CML)中的潜在价值.方法:通过RT-PCR和Western blot检测CML患者和造血干细胞移植供体的骨髓单个核细胞中的CDA表达.对CML KCL-22细胞系转染shRNA和过表达CDA的pBS/U6-Neo质粒来诱导CDA基因沉默或过表达.通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定和细胞集落形成实验评价细胞增殖,通过流式细胞仪检测细胞凋亡.此外,将0.2 mL不同处理的细胞悬浮液(106个细胞/mL)注射到裸鼠中建立裸鼠肿瘤异种移植模型.结果:与造血干细胞移植供体相比,CML患者的骨髓单个核细胞中的CDAmRNA和蛋白表达显著升高(P＜0.05).转染shRNA-CDA显著降低了KCL-22细胞的细胞活力和细胞集落数(P＜0.05).与对照组(4.32％)相比,shRNA-CDA组(13.45％)的细胞凋亡率显著升高(P＜0.05).与对照组相比,shRNA-CDA组的BCL-2蛋白表达水平显著降低,而cleaved caspase-3显著升高(P＜0.05).与对照组相比,shRNA-CDA组的PI3K蛋白表达水平和Akt磷酸化水平显著降低(P＜0.05).接种30d后,与对照组相比,shRNA-CDA组裸鼠的肿瘤重量和肿瘤体积均显著降低(P＜0.05).结论:CDA在人慢性髓系白血病中高表达,CDA基因沉默可在体内和体外抑制肿瘤细胞的生长.其机制与抑制PI3K/Akt信号通路的激活有关.