siRNA干扰TCAB1对人主动脉平滑肌增殖的影响及机制

目的:探究TCAB1沉默对人主动脉平滑肌细胞(HASMC)增殖的影响及可能机制.方法:采用RNAi技术设计并合成靶向沉默TCAB1基因表达的三对特异性siRNA序列(siTCAB 1-331、siTCAB 1-619、siTCAB-749)和一对阴性对照序列(NC),使用lipo2000将siTCAB1、NC转染HASMC,分为3个组:干扰组(siTCAB1)、空白对照组(BC)、阴性对照组(NC),转染24小时倒置荧光显微镜观察细胞转染情况;通过RT-qPCR和Western blot从3个干扰靶点中筛选效果最好的干扰靶点.进一步转染siTCAB1-749后,MTS检测HASMC 24、48、72h的增殖能力,48小时用RT-qPCR和Western blot检测CyclinD1表达量变化,流式细胞术检测HASMC的细胞周期变化.结果:RT-qPCR和WB结果显示siTCAB1-749为最好的干扰靶点;转染24、48、72 h后,siTCAB 1-749组增殖水平明显低于NC组、BC组(P＜0.05).流式结果显示:siTCAB1-749组处于G1期细胞比率有所增加,处于S期细胞比率减少(P＜0.05),且siTCAB1-749组细胞周期蛋白cyclinD1表达也下降(P＜0.05).结论:沉默TCAB1能抑制HASMC的增殖,其机制可能与阻碍细胞周期蛋白cyclinD1有关.