干预气道杯状细胞CLCA对ARDS小鼠损伤程度及炎症机制的影响

目的:探讨干预气道杯状细胞CLCA的表达与功能,对ARDS小鼠肺脏损伤程度的影响,并通过体外细胞研究探讨其机制.方法:制备LPS诱导的ARDS小鼠模型(ARDS组),并在此模型上分别进行干预,包括气道雾化吸入CLCA非特异性阻断剂尼氟灭酸(NFA)(NFA+ARDS组)、气道滴注CLCA特异性抗体(ab-CLCA3) (ab-CLCA3+ARDS组).HE染色观察各组小鼠肺部病理及炎症特征,计算肺损伤评分.运用hCLCA1-siRNA抑制人正常支气管上皮细胞系16HBE中hCLCA1的表达,采用real-timeRT-PCR法验证抑制效果后,检测各组细胞合成多种炎症因子mRNA水平的差异.结果:HE染色显示,ARDS组与NFA+ARDS组相比,肺部病理改变及炎症细胞浸润程度无明显差异,肺损伤评分也没有统计学差异(正常组:2.0± 0.71;ARDS组:6.8± 0.45,NFA+ARDS组7.4± 0.89,P＞0.05).与ARDS组相比,ab-CLCA3+ARDS组肺部病理损伤及炎症细胞浸润程度明显加重,肺损伤评分也升高(正常组:1.8± 0.83;ARDS组:7.6± 0.55,ab-mCLCA3+ARDS组9.8± 0.83,P＜0.05).real-time RT-PCR检测证实成功构建hCLCA1低表达的16HBE细胞系,同时real-time RT-PCR结果显示TNF-α和IL-1β的mRNA表达水平升高(P＜0.05).结论:阻断气道CLCA功能区域,可以加重ARDS小鼠肺部病理损伤程度及炎症细胞浸润水平,提示气道杯状细胞CLCA在ARDS小鼠肺部炎症形成过程中发挥抑制性调节作用.