肝细胞Lamp-2a时间特异性基因敲除大鼠的构建及评估

目的:构建肝细胞Lamp-2a时间特异性基因敲除大鼠模型(L2AKO)并对其评估,为后续胆汁酸代谢研究提供研究基础.方法:将引进的Lamp-2aloxp'-大鼠和Alb-CreERT2工具鼠杂交繁殖,得到基因型Lamp-2aloxp'-Alb-CreERT2+大鼠;后者再与Lamp-2 aloxp/loxp杂交得到双臂loxp阳性和Alb-CreERT2阳性的大鼠,于4-6周时经他莫昔芬的诱导实现对肝细胞Lamp-2a基因的时间特异性敲除.分别通过qPCR方法、Western-Blot技术、免疫组织化学方法对Lamp-2a的敲除结果进行验证.结果:免疫组织化学结果显示:该模型可选择性敲除肝细胞Lamp-2a,而肾脏Lamp-2a正常表达;Western和q1PCR结果显示肝脏Lamp-2a的水平明显降低.L2AKO与WT大鼠相比体重变化无明显差别.肝功生化检测发现L2AKO大鼠AST明显高于WT组大鼠.结论:采用Cre/loxp系统及他莫昔芬诱导的方法成功构建肝细胞Lamp-2a时间特异性基因敲除大鼠,并且L2AKO大鼠生长未受影响,为胆汁酸代谢研究建立了较好的动物模型.