HE4荧光素酶报告基因载体构建与鉴定及其在肾脏纤维化中的作用

目的:通过构建HE4荧光素酶报告基因载体以及质粒转染以分析HIF-1α对HE4靶向调控,明确HE4调控肾脏纤维化的分子机制.方法:采用巢式PCR扩增HE4启动子片段,纯化酶切后定向克隆进pGL-3basic报告基因栽体,进而与PRL-TK质粒共转染HK2细胞,检测荧光素酶的表达HIF-1α过表达质粒转染HK2细胞,western blot检测HE4分子的表达.HK2细胞转染HE4过表达质粒后检测COL4A1、COL1A1分子的表达.结果:获得HE4启动子荧光素酶报告载体,酶切鉴定结果与初期预测一致,荧光素酶检测结果证实HIF-1α可结合于HE4启动子上,从而启动HE4的表达.HK2细胞转染HIF-1α正义过表达质粒,HE4的mRNA和蛋白水平均显著增加.HK2细胞转染HE4过表达质粒,COIAA1、COL1A1表达水平上调.结论:本研究成功构建HE4启动子荧光素酶报告基因栽体,证实HIF-1α为HE4上游靶基因,过表达的HE4可能通过上调COL4A1、COL1A1促进细胞外基质沉积促进肾脏纤维化的发生发展.