IGF-1基因转染对脂肪间充质干细胞活性的影响及机制研究

目的:探讨携带IGF-l基因慢病毒转染脂肪间充质干细胞(ADMSCs)的可行性,对其引起的细胞凋亡机制做出初步研究,并讨论其与PI3K/Akt通路的关系.方法:分离培养ADMSCs,利用脂质体将携带IGF-1基因的慢病毒载体转染入ADMSCs.实验分为Blank组,Lv-non和Lv-IGF-l三组,转染后用MTT法测定各组细胞的生长情况并绘制生长曲线,流式细胞术测定各组细胞凋亡,Westem blot测定各组中IGF-l、Akt、p-Akt及凋亡相关蛋白的表达.结果:成功分离、培养了大鼠脂肪间充质干细胞;携带IGF-1慢病毒载体转染ADMSCs后,流式细胞术检测发现Lv-non和Blank组凋亡率明显高于Lv-IGF-1组(P＜0.05).同时发现Lv-IGF-1组中促凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9蛋白和Bax的表达水平显著下调(P＜0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2显著上调(P＜0.01).MTT法结果显示Lv-IGF-1能促进细胞生长,在5到6天时显著高于其他两组(P＜0.05).通过检测PI3K/Akt通路发现,Lv-IGF-1组PI3K和p-Akt水平显著高于Blank和Lv-non组(P＜0.05),通路被激活.结论:携带IGF-1基因慢病毒载体成功转染ADMSCs.在ADMSCs中过表达IGF-1蛋白可以促进细胞生长,同时抑制细胞凋亡,其机制可能与PI3K/Akt通路蛋白磷酸化相关.