miR-22心肌特异转基因斑马鱼的构建及心肌肥厚的评估

Guo-ran LI,Xiao-wei SONG,Liang-liang MA,Jun GUO,Li-ping MA,Xian-xian ZHAO

Progress in Modern Biomedicine（2016）

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摘要

目的:构建miR-22心肌特异转基因斑马鱼系,在体评估miR-22对于心肌肥厚的作用.方法:构建pTo12-CMLC2-miR-22-IRES-EGFP表达载体.通过显微注射的方法将to12重组质粒于一细胞期注射入斑马鱼受精卵胚胎中,荧光筛选获得心肌特异表达绿色荧光的斑马鱼胚胎,并稳定表达传代.然后对稳定传代的成年斑马鱼心脏进行心肌肥厚及心功能的检测.结果:成功建立了miR-22心肌特异转基因斑马鱼系,通过定量PCR确定心肌中miR-22表达升高,荧光显微镜观察发现斑马鱼心肌出现绿色荧光.miR-22心脏特异过表达的转基因鱼系的成年鱼与野生对照组相比,出现了心肌肥厚的现象,心肌肥厚分子标志物nppa、myh7明显升高.斑马鱼心脏病理切片结果同样显示出miR-22心肌特异转基因斑马鱼出现了心肌肥厚的现象.结论:成功构建了miR-22心肌特异转基因斑马鱼,为研究心肌中miR-22的生物学功能提供了重要的工具,并证明miR-22心脏特异过表达会引起斑马鱼心肌肥厚.

关键词

miR-22,Cardiac-specific,Transgenic zebrafish line,Cardiac hyoertrophy

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