肺炎克雷伯菌FimA的表达纯化及多克隆抗体的制备

目的 表达及纯化肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)菌毛FimA蛋白并制备多克隆抗体. 方法 在Clustal Omega网站上比对不同细菌FimA蛋白的同源性.设计特异引物,PCR扩增肺炎克雷伯菌FimA基因,双酶切后将其连接到表达质粒pET28a,构建重组质粒pET28a-FimA.将pET28a-FimA转化表达菌BL21 star(DE3)后培养,使用IPTG诱导FimA蛋白表达.使用IEDG在线网站分析FimA蛋白的B细胞表位,然后用层析纯化的重组FimA蛋白免疫小鼠,获得免疫血清,ELISA检测IgG、IgG1、IgG2a和IgA. 结果 肺炎克雷伯菌的FimA与其他FimA蛋白同源性较低,为23.6％～30.6％.构建的重组质粒pET28a-FimA在大肠埃希菌中能表达21.6×103的重组FimA蛋白,经亲和层析后得到单一电泳条带的高纯度目的蛋白.用FimA蛋白免疫小鼠,获得高滴度的IgG和IgA,且IgG2a的A450值高于IgG1. 结论 成功构建了表达质粒pET28a-FimA,获得高纯度的重组蛋白FimA.FimA具有免疫原性,用该蛋白免疫小鼠获得高滴度的多克隆抗体.